品牌 AAT Bioquest 貨號(hào) 21180 規(guī)格 1000 Tests 供貨周期 現(xiàn)貨 主要用途 Cell Meter? 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥
AAT Bioquest 21180 Cell Meter ™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒
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AAT Bioquest 熒光細(xì)胞內(nèi)pH測(cè)定試劑盒
美國(guó)AAT Bioquest Inc.( 前身是ABD Bioquest ，Inc.) 是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest 的產(chǎn)品幫助 quan 世 jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest 會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。
AAT Bioquest 21180 Cell Meter ™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒 1000 Tests
產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest
產(chǎn)品貨號(hào)：21180
產(chǎn)品名稱：Cell Meter ™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：1000 Tests
AAT Bioquest 熒光細(xì)胞內(nèi)pH測(cè)定試劑盒
AAT Bioquest 21180 Cell Meter ™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒 1000 Tests
細(xì)胞內(nèi)pH 值變化與多種生理和病理過(guò)程有關(guān)，包括細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡，受精，惡性腫瘤，多藥耐藥性，離子轉(zhuǎn)運(yùn)，溶酶體貯積癥和阿爾茨海默病。細(xì)胞計(jì)™熒光法細(xì)胞內(nèi)pH 測(cè)定試劑盒利用AAT Bioquest 專有的熒光指示劑來(lái)測(cè)量細(xì)胞內(nèi)pH 值的相對(duì)變化。它是一種均質(zhì)的動(dòng)力學(xué)活細(xì)胞熒光測(cè)定，采用標(biāo)準(zhǔn)程序或酸負(fù)荷程序。標(biāo)準(zhǔn)方案設(shè)計(jì)用于測(cè)量感興趣的治療靶點(diǎn)，治療時(shí)細(xì)胞內(nèi)pH 值降低?！八嶝?fù)荷"程序旨在測(cè)量與GPCR 活化或生長(zhǎng)因子活性引起的細(xì)胞代謝變化相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)pH 值的增加。通過(guò)“酸負(fù)荷"程序，在熒光pH 染料以最小體積加載到細(xì)胞中后，加入氯化銨溶液。該“酸加載"步驟之后在相對(duì)大體積（~4X ）的緩沖液中添加激動(dòng)劑。突然的體積變化引發(fā)細(xì)胞中的氨（NH3 ）外排，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)pH 值迅速降低，從而降低熒光信號(hào)。激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)pH 后續(xù)恢復(fù)的影響通過(guò)相對(duì)熒光信號(hào)增加來(lái)測(cè)量。
平臺(tái)
熒光酶標(biāo)儀
Excitation ：490 納米
Emission ：535 納米
Cutoff ：515 納米
推薦板：黑色墻壁/ 透明底部
組件
組件A ：RatioWorks ™ BCFL ，AM 1 瓶
組件B ：10X Pluronic F127 Plus 1 瓶 （10 mL ）
組分C ：HHBS （Hanks 緩沖液，含20 mM 肝素） 1 100 mL ）
組分 D ：50 mM 準(zhǔn)備使用™probenecid 1 瓶 （10 mL ）
用于標(biāo)準(zhǔn)電池負(fù)載（單板）
1. 在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2. 加入等體積的RatioWorks ™ BCFL ，AM 染料加工溶液
3. 在37 °C 孵育1 小時(shí)
4. 在Ex/Em= 490/535 nm （截止= 515 nm ）下讀取熒光，加入50 μL/ 孔化合物（或比率為500/530 nm 和440/530 nm ）
協(xié)議摘要
用于酸負(fù)荷（一個(gè) 96 孔板）
1. 在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2. 去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基
3. 添加 RatioWorks ™ BCFL 、AM 染料工作溶液（50 μL/ 孔/96 孔板）
4. 在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)
5. 添加 220 mM NH4 氯（5 μL/ 孔）
6. 在室溫下孵育 15 分鐘
7. 在Ex/Em= 490/535 nm （截止= 515 nm ）下讀取熒光，加入200 μL/ 孔化合物（或比率為500/530 nm 和440/530 nm ）
重要事項(xiàng)：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20 °C 。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
RatioWorks ™ BCFL ， AM 庫(kù)存解決方案
將 200 μL DMSO 加入 RatioWorks BCFL 、AM （組分 A ）的小瓶中，并充分混合以制成 RatioWorks ™™ BCFL 、AM 儲(chǔ)備溶液。
注意 20 μL 重構(gòu) RatioWorks ™ BCFL 、AM 儲(chǔ)備溶液足以用于 1 板標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞負(fù)載。10 μL 重構(gòu) RatioWorks ™ BCFL 、AM 儲(chǔ)備溶液足以用于 1 板酸負(fù)荷。RatioWorks ™ BCFL ，AM 儲(chǔ)備溶液可以儲(chǔ)存在≤-20oC 如果管子密封嚴(yán)密，則一個(gè)月。避光。
工作溶液的制備
1. 用于標(biāo)準(zhǔn)電池負(fù)載（單板）
1. 將 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus （組分 B ）加入 9 mL 的 HHBS （組分 C ）中，充分混合制成 1X 測(cè)定緩沖液。
注意對(duì)于需要丙磺shu 上樣的細(xì)胞（例如CHO 細(xì)胞），稀釋50 mM 準(zhǔn)備以™ 1 至5 mM 的濃度使用丙磺shu （組分D ）（CHO 細(xì)胞 shou xuan 5 mM ）。
2. 將 20 μL 重構(gòu)的 RatioWorks BCFL 、AM 儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 的 1X 測(cè)定緩沖液中，充分混合，制成 RatioWorks ™™ BCFL 、AM 染料工作溶液。該RatioWorks ™ BCFL ，AM 染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2 小時(shí)。
2. 用于酸負(fù)荷（一個(gè) 96 孔板）
1. 將 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus （組分 B ）加入 4 mL 的 HHBS （組分 C ）中，充分混合制成 1X 測(cè)定緩沖液。
注意對(duì)于需要丙磺shu 上樣的細(xì)胞（例如CHO 細(xì)胞），稀釋50 mM 準(zhǔn)備以™ 0.5 至2.5mM 的濃度使用丙磺shu （組分D ）（CHO 細(xì)胞 shou xuan 2.5 mM ）。
2. 將 10 μL 重構(gòu)的 RatioWorks BCFL 、AM 儲(chǔ)備溶液加入 5 mL 的 1X 測(cè)定緩沖液中，充分混合，制成 RatioWorks ™™ BCFL 、AM 染料工作溶液。該RatioWorks ™ BCFL ，AM 染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2 小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞載量pH 測(cè)定
1. 將 100 μL/ 孔（96 孔板）或 25 μL/ 孔（384 孔板）RatioWorks ™ BCFL 、AM 染料工作溶液添加到細(xì)胞板中。
注意 如果您的化合物干擾血清，請(qǐng)務(wù) bi yong HHBS 緩沖液替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基（100 孔板為 96 μL/ 孔，染料上樣前為 25 孔板為 384 μL/ 孔）。
2. 將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30 分鐘，然后在室溫下再孵育板30 分鐘。
注意如果測(cè)定需要37 °C ，請(qǐng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)需進(jìn)一步室溫孵育。
3. 使用 HHBS 或所需的緩沖液制備復(fù)合板。
4. 通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 535 nm （截止= 515 nm ）或500/530 nm 和440/530 nm （截止= 515 nm ）的熒光進(jìn)行比率測(cè)量來(lái)運(yùn)行pH 測(cè)定?；衔锾砑恿繛?span> 50 μL/ 孔（96 孔板）或 25 μL/ 孔（384 孔板）。
注意 該測(cè)定應(yīng)在化合物添加后 3 至 5 分鐘內(nèi)完成，但建議在測(cè)定開(kāi)發(fā)期間至少收集 8 分鐘的數(shù)據(jù)。
運(yùn)行酸負(fù)荷的pH 測(cè)定
1. 從細(xì)胞板中取出生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
2. 將 50 μL/ 孔/96 孔板 RatioWorks ™ BCFL 、AM 染料工作溶液添加到細(xì)胞板中。
3. 將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30 分鐘，然后在室溫下再孵育板30 分鐘。注意：如果測(cè)定需要37 °C ，請(qǐng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)需進(jìn)一步室溫孵育。
4. 加入 5 μL 220 mM NH4Cl 并將板離心 5 秒鐘。在室溫下孵育15 分鐘。
注意新罕 bu shen 爾州4Cl 溶液應(yīng)在HHBS （組分C ）中新鮮制備。
5. 使用 HHBS 或所需的緩沖液制備復(fù)合板。
6. 通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 535 nm （截止= 515 nm ）或500/530 nm 和440/530 nm （截止= 515 nm ）的熒光進(jìn)行比率測(cè)量來(lái)運(yùn)行pH 測(cè)定?；衔锾砑恿繛?span> 200 μL/ 孔/96 孔板。
注意 該測(cè)定應(yīng)在化合物添加后 3 至 5 分鐘內(nèi)完成，但建議在測(cè)定開(kāi)發(fā)期間至少收集 8 分鐘的數(shù)據(jù)。
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