Takara Bio 中國有兩家公司——寶生物工程（大連）有限公司和寶日醫(yī)生物技術（北京有限公司。寶生物工程（大連）有限公司是 Takara Bio Inc.在中國的生產(chǎn)基地，寶日醫(yī)生物技術（北京）有限公司負責 Takara Bio Inc.旗下所有品牌在中國市場的宣傳及銷售。
為了準確地進行基因表達量分析，必須滿足只有cDNA作為模板檢出的先決條件，但Total RNA中常?；煊谢蚪MDNA，并可以直接作為PCR反應的模板進行擴增，因此會造成解析結果不準確。為了避免這種情況發(fā)生，通常將檢測用引物設計在內(nèi)含子前后的外顯子上，使基因組DNA得不到擴增。但是，此方法不適合具有單個外顯子的基因或兩個外顯子之間所跨的內(nèi)含子過小的基因，同時當基因組上有偽基因存在時、或設計引物對基因組有非特異性擴增時、以及基因信息沒被 wan quan 解析的生物種等也同樣不適合于本方法。在這種情況下，我們常常需要對Total RNA樣品進行DNase I處理，以除去殘存的基因組DNA。而DNase I處理通常要進行復雜的純化操作，同時會造成RNA的降解和損失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因組DNA進行Real Time RT-PCR反應的專用反轉錄試劑。Kit中使用了具有較強DNA分解活性的gDNA Eraser，通過42℃，2 min即可除去基因組DNA。同時由于反轉錄試劑中含有抑制DNA分解酶活性的組分，經(jīng)過gDNA Eraser處理后的樣品可以直接進行15 min的反轉錄反應合成cDNA，因此，20 min內(nèi)即可迅速完成從基因組DNA去除到cDNA合成的全過程。
使用本制品合成的cDNA適用于嵌合法和探針法qPCR分析，可以根據(jù)實驗目的，選擇與TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 組合使用。
*：Takara嵌合法Real Time PCR（qPCR）產(chǎn)品的名稱從2017年12月下旬開始，將逐步變更為「TB Green系列」。產(chǎn)品Code、性能和原有產(chǎn)品相比沒有變化，請繼續(xù)放心使用。
2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反應用模板cDNA，是進行2 Step Real Time RT-PCR反應的理想試劑。
3. 反轉錄引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix，可以均勻合成樣品中的各種cDNA。
4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探針qPCR分析法各自適合的反應體系，可以根據(jù)分析方法選擇體系。
TB Green qPCR分析法和探針qPCR分析法區(qū)別如下：
(1) 反轉錄反應中RT Primer Mix的用量。
(2) 反轉錄反應中總RNA的用量。
5. Real Time RT PCR定量需要建立標準曲線，建立標準曲線的條件就是需要將總RNA和反轉錄cDNA稀釋到較低的濃度。如果用水或TE Buffer稀釋時，由于模板濃度低不穩(wěn)定，因而會縮小曲線范圍，結果準確度降低。本制品中附加了標準曲線制作用稀釋液EASY Dilution (for Real Time PCR) ，將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時也能夠進行準確稀釋，容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準確定量的標準曲線。
注意事項
1．使用本制品合成的cDNA與TB Green關聯(lián)制品組合使用時，建議使用：
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
以上制品與本制品組合使用，可以得到可信度高的結果。
本制品與TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 組合使用時，有時反應性能不好，不推薦使用。
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